GDS-80基因枪低压导入HBT转染浅表小鼠肝细胞
摘要:在《Human Gene Therapy》发表的一篇文章中,实验者用GDS-80低压基因枪在30psi的可耐受压力下进行三次轰击可以产生与在更高压力下进行一次轰击相当的转染效率,这通常会导致严重的肝脏撕裂伤。总之,用金DNA基因枪轰击肝脏是HBT转染浅表肝细胞的一个潜在的有用的替代方法,特别是因为它不会引起严重的肝损伤。
虽然体内非病毒基因的投递对肝基因治疗至关重要,但仍存在许多技术障碍。将编码DNA的增强绿色荧光蛋白(EGFP)包覆在金颗粒(金-DNA)上,溶解于磷酸盐缓冲盐(纯DNA),并作为聚合物佐剂(jetPEI)-半乳糖苷酶溶液(聚合物-DNA)制备。采用非病毒方法进行小鼠肝转染,包括基于流体动力学的纯DNA转染(HBT)、聚合物DNA的转运和肝内注射、纯DNA、金DNA和聚合物DNA的基因枪轰击。只有HBT和基因枪轰击产生大量EGFP肝细胞。在优化的条件下,HBT除肝边缘外,其全肝转染率为20%。HBT导致明显的肝梗塞,最突出的是肝边缘。EGFP肝细胞主要位于浅层。
HBT和基因枪轰击均能有效地转染小鼠肝细胞。重型肝梗塞阻碍HBT后肝细胞外基因表达。在30 psi的条件下,用加速粒子基因枪反复轰击金-DNA,是HBT在体内向浅表肝细胞传递基因的潜在替代品。
在《Human Gene Therapy》发表的一篇文章中,研究人员用增强的绿色荧光蛋白编码 DNA 进行低压基因枪轰击检查小鼠肝脏转染的有效性,并将结果与其他化学或物理方法获得的结果进行比较。结果表明,低压手持式基因枪仅通过 20-45 psi 的压力,即可将金 DNA 轰击到小鼠肝脏中。
实验中,为了确定CTGF与E7 DNA疫苗连接后是否能增强小鼠E7特异性T细胞介导的免疫应答,研究人员用流式细胞术分析了E7特异性CD4+和CD8+T细胞前体的细胞内细胞因子染色。结果证实了接种与E7相关的编码CTGF的DNA可显著增强E7特异性T细胞免疫。
为了确定E7特异性CD8+T细胞反应的增强是否转化为E7特异性抗肿瘤保护作用,研究人员进行了体内肿瘤保护实验,证实了接种CTGF/E7 DNA 增强了表达E7肿瘤细胞系的小鼠的肿瘤保护作用。
结果显示,当CTGF与DNA疫苗中的E7抗原相连时,CTGF可以保护接种的小鼠免受表达E7的肿瘤细胞的致命攻击。
实验中研究人员发现,用GDS-80低压基因枪在30psi的可耐受压力下进行三次轰击可以产生与在更高压力下进行一次轰击相当的转染效率,这通常会导致严重的肝脏撕裂伤。总之,用金DNA基因枪轰击肝脏是HBT转染浅表肝细胞的一个潜在的有用的替代方法,特别是因为它不会引起严重的肝损伤。
在本研究中,实验人员证明了将HPV16 E7抗原与CTGF DNA连接可显著提高表达E7的DNA疫苗的效力。
实验中,研究人员在接种后1天或5天取小鼠腹股沟淋巴结,用PE结合抗CD11c抗体流式细胞仪分析了CD11c+细胞百分率,接种小鼠并收集了富含CD11c+的细胞。
[1] Gene Gun Bombardment with DNA-Coated Gold Particles Is a Potential Alternative to Hydrodynamics-Based Transfection for Delivering Genes into Superficial Hepatocytes[J]. Human Gene Therapy, 2008, 19(4):391.
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